鴿子飛行能力基因檢測試劑盒（PCR-熒(ying)光探針法(fa)）使用說明書
【產品(pin)名(ming)稱】
通用名稱：鴿子飛行能力基因檢測試劑盒（PCR-熒(ying)光探針法）
【預期用途(tu)】
本(ben)試劑盒(he)用于鴿子飛行能力基因定性檢測，可對鴿子的飛行能力進行(xing)預測。
【檢測原理(li)】
根據(ju)鴿子飛行能力基因設計特(te)異(yi)性引物(wu)和探針，利用熒(ying)光定量PCR技術，通過檢測(ce)熒光(guang)的釋放(fang)和強度(du)，來檢測(ce)飛行能力基因。
【試劑盒組成】
本產品由特異性(xing)引(yin)物(wu)探針、Taq酶以及反應緩沖液組成。
【主要組成成分】
序號 | 組分 | 標示裝(zhuang)量(liang) /管 | 數(shu)量(liang) （管(guan)） |
1 | 10 x qPCR Buffer | 400 ul | 1 |
2 | dNTP(2.5mM) | 240 ul | 1 |
3 | Hot Star Taq (5u/ul) | 30 ul | 1 |
4 | LDHA引物探針(zhen) | 200 ul | 1 |
5 | DRD4a引物探針 | 200 ul | 1 |
6 | DRD4b引物探(tan)針 | 200 ul | 1 |
【儲存條件及有效期】
-20℃避(bi)光保存有效(xiao)期為12個(ge)月；切忌反(fan)復(fu)凍融。
【樣本(ben)要求】
1、羽(yu)毛(mao)：采集胸部或腹部或腿部羽(yu)毛(mao)2根，切忌使用自然脫落的羽毛。
2、全血：使用(yong)EDTA作為抗凝劑，切(qie)忌使用肝(gan)素抗凝。要(yao)求(qiu)使用新鮮全(quan)血(xue)，或(huo)在2～8℃保存(cun)不超過7天，或在-20℃以下(xia)保存不超過(guo)一(yi)個月，應盡量避免(mian)反(fan)復凍融。
【檢驗方(fang)法】
1、樣本處理(li)與核酸提(ti)取，具體(ti)操作參照相關操作說(shuo)明書(shu)。
（1）0.2ml PCR管中，加入羽毛2-4根，加入Reagent A 20ul（注(zhu)意淹沒樣本），99℃加熱(re)20分鐘；
（2）向上(shang)一步的Pcr管中加(jia)入Reagent B 100ul，5000rpm離心30秒-1分鐘，備用；
2、儀器準備將每臺儀器接(jie)通(tong)電源，檢(jian)查是否運轉正(zheng)常。
3、物品(pin)準備(bei)：離心機(ji)、冰盒、移(yi)液器(qi)、吸頭(tou)；試劑準備（未分裝規格使用）：將PCR反應液解(jie)凍、混勻(yun)，瞬時離心后分裝14μL/管。
序號(hao) | 組分 | 用量(liang) | 反應液 |
1 | 10 x qPCR Buffer | 2 ul | 14ul反應液(ye) |
2 | dNTP(2.5mM) | 1.6 ul |
3 | Hot Star Taq (5u/ul) | 0.2 ul |
4 | 去離子水 | 10.2 ul |
管號1 | 管(guan)號2 | 管號3 |
14ul反應(ying)液 | 14ul反應液(ye) | 14ul反應液 |
4ul LDHA引物探針 | 4ul DRD4a引物探針 | 4ul DRD4b引物探針 |
2ul DNA模板 | 2ul DNA模板 | 2ul DNA模板 |
4、 PCR擴增條件（反應(ying)體系為20μL）
擴增(zeng)溫(wen)度 | 擴增時間 | 循環數 |
95℃ | 5min | 1 |
95℃ | 15sec | 40 cycles |
60℃ | 30sec（采集熒光）FAM及VIC |
5、熒光定量檢測
結果判定
反應液 | 飛行能(neng)力基因(yin) 基因型 |
野(ye)生(sheng)基因型 | 雜合基因型 | 突變(bian)基因型 |
管號(hao)1 LDHA基(ji)因 | GG | AG | AA |
管(guan)號(hao)2 DRD4a基因 | CC | CT | TT |
管號3 DRD4b基因 | CC | CT | TT |
FAM VIC信(xin)號判(pan)斷 | VIC＜33，FAM無ct | FAM-VIC絕對(dui)值＜3 | FAM＜33，VIC無ct |
備注 | FAM可能(neng)有ct，FAM-VIC絕對值＞5 |
| VIC可(ke)能有ct，FAM-VIC絕(jue)對(dui)值＞5 |
【檢驗方法局限性】
本方(fang)法只適(shi)用于鴿子飛行能力基因檢測。
【產品性能(neng)指標】
1. 特異性(xing)：對(dui)特異性(xing)參考(kao)品進行(xing)檢(jian)測(ce)，所有參考(kao)品檢(jian)測(ce)結果陰性(xing)。
2. 準確性：對檢測范圍內的(de)不同基因型的(de)參考品進行(xing)檢測，能檢出相(xiang)應基因型。
3. 最(zui)低檢出限：應(ying)不高于5ng/μL。
4. 重復(fu)性：檢測范圍內的不同(tong)基因(yin)型(xing)的重復性參(can)(can)考(kao)品，每個參(can)(can)考(kao)品進行10次檢測，結果能準確(que)分型，且相應檢測結果Ct值的變異系(xi)數（CV）應(ying)≤5.0%。
5. 有效期：試劑盒于-20避光(guang)保(bao)存，有效期為12個月。
【注意(yi)事(shi)項】 實驗前請仔細閱讀說明書
1. 本試劑盒僅鴿子飛行能力基因體外檢測。有(you)關(guan)實(shi)驗室(shi)管理規(gui)范嚴格(ge)按(an)照行政主管部門頒(ban)布的有(you)關(guan)基因擴增檢測實(shi)驗室(shi)的管理規(gui)定執行。
2. 試(shi)劑盒應低溫(wen)運輸(shu)和保(bao)存，試(shi)劑盒內各試(shi)劑使用前，請短(duan)暫(zan)離心。
3. 檢(jian)測時，提取樣(yang)本必須在生(sheng)物安全柜中(zhong)進行，且使用時要(yao)注意橫(heng)向污染(ran)。
4. 實驗應嚴(yan)格分區(qu)操作：第一區(qu)：試劑制備區—準備擴增所(suo)需試劑；
第二區：樣本處理區—待測樣本和(he)對(dui)照品(pin)處理；
第三區：PCR擴增區(qu)—PCR擴(kuo)增檢測。
本產品為一次性(xing)用(yong)品，使用(yong)后(hou)的(de)試劑(ji)盒和樣(yang)本等廢棄物應作(zuo)為傳染源按照(zhao)國家相關法律法規處(chu)理。
